التأثير التثبيطي للمضاد الحيوي سيفكزيم والسيفترياكسون ضد البيتالاكتاميز المنتج من بكتريا Proteus mirabilis

الباحث

تقى حسن هادي

المشرف

انتصار حسين علي

الجامعة

الجامعة التكنولوجية

الكلية / القسم

قسم العلوم التطبيقية / التقنيات الأحيائية

الشهادة

ماجستير

السنة

2023

لغة الرسالة

عربي

الكلمات المفتاحية

البيتالاكتاميز; بكتريا Proteus mirabilis; سيفكزيم; سيفترياكسون

تم الحصول على العزلات البكتيرية لبكتيريا ‎Proteus mirabilis‏ من مرضى التهاب المسالك البولية من مستشفيات بغداد/ مختبرات مدينة الطب وتم تشخيصها مظهرياً ومجهرياً للتأكد من نقاوتها و تشخيصها بجهاز ‎.Vietk2 system‏ و ‎Gey)‏ بعدها في وسط الإنتاج الزرعي وسط مرق اللوريا مع إضافة البنسيلين لتحفيز إنتاج الانزيم. أجريت بعد ذلك عمليات الأستخلاص و لكون الأنزيم داخل خلوي تم أستخدام جهاز الطرد المركزي المُبرد ‎Centrifuge Cooling‏ وجهاز تكسير الخلايا بالامواج الفوق الصوتية ‎ultra-sonicater‏ للحصول على الأنزيم خارج الخلية ثم ترشيح المستخلص الناتج للحصول على راشح يحتوي على الانزيم الخام. بعد ذلك أختبرت درجة الحرارة المثلى و الرقم الهيدروجيني الأمثل لأنتاج الأنزيم و أظهرت النتائج أن أفض ل درجة حررة لأنتاج الأنزيم كانت 37 درجه مئوية و الرقم الهيدروجيني الأمثل لأنتاج ‎al‏ 7.0 . حيث تمت تنقية الإنزيم كروماتوغرافيا التبادل الأيوني كخطوة تنقية أولية ثم كروماتوغرافيا الترشيح الهلامي كخطوة تنقية أخيرة » تم تحديد الفعالية النوعية لكل خطوة من خطوات التنقية حيث أظهرت نتائج تنقية أنزيم البيتالاكتميز ‎Beta_lactamase‏ المستخلص من عزلة 5,./1//361/5 بأستخدام عمود التبادل الأيوني ‎DEAE-Cellulose‏ ان الفعالية النوعية ‎activity‏ 50601116 للأنزيم كان 3 إوحدة/ملغم بروتين وعدد مرات تنقية 1.345 و حصيلة أنزيمية 80.71؟: و أظهرت نتائج التنقية بإستخدام عمود الترشيح الهلامي ‎SephacrylS-200‏ أن الفعالية النوعية كانت 28.71 وحدة/ملغم بروتين و عدد مرات تنقية 2 و حصيلة أنزيمية 29671.7 . تم اختبار درجة الحرارة المثلى والرقم الهيدروجيني الأمثل لنشاط وأستقرارية الإنزيم » وأظهرت النتائج أن درجة الحرارة المثلى لفعالية الإنزيم كانت 37 درجة مئوية ودرجات الحرارة المثلى لأستقرارية الإنزيم كانت 30درجة I مئوية و 40 درجة مئوية » بينما كان الرقم الهيدروجيني الأمثل لفعالية الأنزيم هو 7.0 واستقرار الانزيم هو 57.0 8.0 على التوالي . درست تأثشير المضادات الحيوية على فعالية انزيم ‎Beta_lactamase‏ المستخلص و المنقى من ‎LES‏ ‎Gus P. mirabilis‏ كانت نتائج تأثير المضدد الحيوي السيغكزيم ‎Cefixime‏ على فعالية الانزيم هي 12 وحده/ملغم و نتائج تأثير المضادد الحيوي السيفترياكسون ‎Ceftriaxone‏ على فعالية الانزيم هي 3 وحده /ملغم بينما كانت نتائج تاثير المضاديين الحيوبين السيفكزيم والسيفترياكسون ‎Lee‏ على فعالية ‎ay!‏ هي 0.012 وحدهاملغم وهذا يدل على ان عمل كل من المضاديين ‎Ceftriaxone ,Cefixime‏ معا لهما تأثيرا فعالا على تثبيط فعالية الأنزيم الذي يعتبر من اهم عوامل الضروة التي تمتلكها بكتريا ‎ P.mirabilis‏ .

The Bacterial isolates of Proteus mirabilis were obtained from patients with urinary tract infection from Medical city hospitals and were diagnosed morphologically and microscopically to ensure their purity and diagnosis with Vitek2 system. Then it was cultured in the production media Luria broth culture media with the addition of penicillin to stimulate the production of Beta_lactamase enzyme. The intracellular enzyme was then extracted using a cooling centrifugation and ultra-sonicater process to obtain the filtrate that represents the crude enzyme. Then the optimum temperature and pH for enzyme production were tested and the results showed that the best temperature for enzyme production was 37°C and the optimum pH for enzyme production was 7.0. The enzyme purification processes were carried out, which included ion-exchange chromatography a preliminary purification step, gel filtration were used to complete the purification process, and the enzyme activity was determined for each purification step. The results of purification of Beta_lactamase enzyme from P.mirabilis using DEAE - cellulose ion column showed that the specific activity was 18.83 units per milligram protein with 1.345 purification times and enzymatic yield of 80.71 %, the results of purification using gel filtration using Sephadex G200 showed that the specific activity was 28.71 units per milligram protein with 2.0 purification times and enzymatic yield 71.7% , which was the best step in the purification process due to high enzyme’s specific activity. The optimum temperature and pH for the enzyme’s activity and stability were tested. The results showed that the optimum temperature for the enzyme’s activity was 37 °C and the optimum temperatures for the stability of the enzyme were 30°C and 40°C, while the optimum pH for the activity was 7.0 and stability of enzyme was 7.0 and 8.0 . Then the effect of the inhibitors on the activity of the enzyme extracted and purified from P.mirabilis was studied, and the results showed the effect of the antibiotic ceftriaxone on the activity of the beta-lactamase enzyme was 0.093units/mg and the antibiotic cefixime was 0.082 units/mg while result of mixing both antibiotics ceftriaxone and cefixime on the activity of the beta-lactamase enzyme was 0.012units/mg, This proves that the action of the two antibiotics together has an effective effect on inhibitory the activity of the enzyme, which is one of the most important virulence factors that bacteria possess.

طلب نسخة من الملف

الملفات غير منشورة على الموقع. اترك بياناتك وسيتواصل معك موظفو قسم الشؤون الثقافية والفنون لإرسال النسخة مجاناً.

الاسم

رقم الهاتف

البريد الإلكتروني

الغرض من الطلب (اختياري)

إرسال الطلب