التوصيف الجزيئي لبكتريا Bacillus subtilis المعزولة من التربة ودراسة تأثيرها المضاد للبكتريا المرضية

الباحث

سارة صالح سليمان الربيعي

المشرف

نجوى ابراهيم خليل البرهاوي

الجامعة

جامعة الموصل

الكلية / القسم

كلية التربية للعلوم الصرفة / قسم علوم الحياة

الشهادة

ماجستير

السنة

2022

لغة الرسالة

عربي

الكلمات المفتاحية

Bacillus subtilis ; التوصيف الجزيئي ; التضاد البكتيري ; بكتريا التربة

تضمنت الدراسة الحالية جمع 25 عينة من الترب المحيطية بجذور النباتات في مدينة الموصل (حاوي يارمجة وحي الطيران في الجانب الأيمن من المدينة، وحي الزهور في الجانب الايسر من المدينة) للفترة من 11-1الى 12-25/ 2020. عزلت منها 10 عزلات وشخصت مظهرياً ومجهرياً Shad عن الاختبارات البايوكيميائية على أنها ،Bacillus subtilis واختير منها ثلاثة عزلات اطلق عليها Sar2, Sarl ,52313 وأجري لها اختبار حساسية لعشرة أنواع من المضادات الحيوية وأظهرت تأثيرًا متبايئًا عليهاء إذ كانت مقاومة لمضادين حيوبين هما: Amoxicillin, Cefixime وحساسة لثمانية مضادات حيوية أخره بى وهي: Bacitracin, Ampicillin, Penicillin, Streptomycin, -Gentamycin, Amikacin, Tetracyclin, Azithromycin أجري التشخيص الجزيئي باستخدام عملية الترحيل Electrophoresis jlygSll لعينات DNA المستخلصة من العزلات الثلاثة المنتخبة وعينة ال DNA المستخلصة من LSS القياسية DLN Bacillus subtilis البرية BBI وظهرت ثلاثة حزم من ال DNA الجينومي ذات احجام متساوية وكبيرة وهي (1550، 1550، 1445 (bp كونها قطعت مسافات قصيرة وقريبة من حفر هلام الاكاروزوكانت مساوية تقريبا لحجم ال DNA الجينومي للسلالة البرية subtilis 1 .8 ، مما يؤكد تشخيص العزلات المحلية الثلاثة ( Sarl ,52313:5312) على مستوى الجنس والنوع انها بكتيريا subtilis .18. كما نتج عن Jeli البلمرة التضاعفي المتخصص Specific Polymerase Chain (PCR) Reaction وبالاعتماد على الجين rRNA 165الخاص ببكتيريا subtilis .8 ، وجود حزمة واحدة مضخمة لكل عزلة من موقع محدد 2 DNA الجينومي المستخلص من العزلات الثلاثة من البكتريا قيد الدراسة وذلك نتيجةً للتفاعل التضاعفي والمتخصص للبادئن 165 rRNA الخاص ببكتيريا B.subtilis مع عينات DNA التي ظهرت باحجام كبيرة ومتساوية وقدر حجمها الكلي ب 1550، 1550 و 445آ]قاعدة نتروجينية على التوالي ، ومقارية في حجمها مع aaa حزمة العزلة القياسية 8.51/511/15 السلالة 8181 522 1قاعدة نتروجينية، بدلالة قياسها مع الدليل الحجمي -DNA Ladder عند استخدام تقانة تتابع الحمض النووي sequencing 10114 لتحديد تسلسل القواعد النتروجينية في قطع DNA النقية لنواتج التفاعل التضاعفي المتخصص لبكتيريا B.subtilis والخاصة بالجين ،16S rRNA اظهرت نتائج التحليل باستخدام برنامج DNA BLAST وجود تشابه Gaile العزلة القياسية البرية 8181 B.subtilis strain المسجلة في بنك الجينات | والعزلات المحلية الثلاثشكة 5313:52312,5311 وبنسبة 98.19 ، 98.13 و %94.61 على التوالي، لذلك ظهرت العزلتين 5312 و Sarl في اقصى chal) العلوي والسفلي من الشجرة التطورية وبينهما وقعت العزلة الثالثة 5213. كما تم اختبار التأثير التضادي للعزلات pS) قيد الدراسة بطريقة الانتشار بأقراص الاكار yells Agar Diffusion method ت النتائج عدم حدوث أي تأثير تثبيطي لهذه البكتريا ضد الأنواع البكتيرية المرضية الخمسة Stphylococcus ،Stphylococcus aureus Eschericha coli, Klebsiella pneumoniae ،haemolyticus و Pseudomonas Lay aeruginosa كان لرواشح المزارع البكتيرية AS المخففة نصفياً 200، 100 50 ملغم asl * وغير المخففة، بطريقة الانتشار في الحفر Agar Well Diffusion method فعالية تثبيطية متفاوتة تجاه نمو البكتريا المرضية بأنواعها الخمسة واكثر تاثيرا على البكتيريا الموجبة لصبغة كرام قياسا بتاثيره الاقل على البكتيرياالسالبة لصبغة كرام. من خلال الكشف بجهاز 000-115©عن مواد الأيض الثانوي لراشح بكتريا (Sarl) Bacillus subtilis التي تم اختيارها لكونها مطابقة وبنسبة 9998.19 مع البكتريا البربة Bacillus subtilis الواردة في بنك الجينات القياسية ، تبين انها مكونة من 33 Bale كميائية حسب عدد القمم الناتجة بعد حقن الراشح في جهاز GC وعندما أدخلت هذه المعلومات في جهاز 315 تم تشخيصها باسمائها مع حساب الوزن الجزيئي لها وكمية ما تشغله من مساحة كنسبة مئوية ضمن الراشح المستخدم قيد الدراسة.

A The current study included 25 samples of the soils surrounding to plant roots in the city of Mosul (Hawi Yarmoja and Al-Tayaran neighborhood on the right side of the city, and Al-Zohour neighborhood on the left side of the city from 1-11 to 25-12-2020. Ten isolates were isolated and identified morphologically and microscopically as well as biochemically as Bacillus subtilis.The sensitivity test of the three selected isolates named Sar1, Sar2 and Sar3 was conducted on ten types of antibiotics and it showed a different effect on them, as they were resistant to two antibiotics (Amoxicillin, Cefixime), and sensitive to eight other antibiotics, which are (Bacitracin, Ampicillin, Penicillin, Streptomycin, Gentamycin, Amikacin, Tetracyclin and Azithromycin). Molecular diagnosis was carried out using electrophoresis of DNA samples extracted from the three selected isolates and DNA sample extracted from wild B. subtilis strain BB1. Three bundles of genomic DNA of equal and large sizes appeared, as they traveled short and close distances from the wells of the agarose gel and were approximately equal to the size of the genomic DNA bundles of the wild strain Bacillus subtilis BB1, confirming the diagnosis of the three local isolates (Sar1, Sar2 and Sar3) at the genus and species level that they are B. subtilis bacteria. The Specific Polymerase Chain Reaction (PCR), based on the 16S rRNA gene of Bacillus subtilis, resulted in the presence of one amplified band for each isolate from a specific site of the genomic DNA extracted from the three isolates of the bacteria understudy as a result of the replication and specific reaction of the 16S rRNA primer which specific for B. subtilis with DNA samples that appeared in large and B equal sizes and its total size was estimated at 1550, 1550 and 1445 nitrogen bases, respectively, and its size was close to the size 1522 nitrogen base of the standard isolate B. subtilis strain BB1, as measured by the DNA Ladder. When using DNA sequencing technology to determine the sequence of nitrogenous bases in pure DNA fragments of the specific replication reaction products of B. subtilis specific to the 16S rRNA gene, the results of the analysis using the DNA BLAST program showed a similarity between the wild standard isolate B. subtilis strain BB1 recorded in the GeneBank and the three local isolates Sar1,Sar2, Sar3 and at a rate of 98.19, 98.13 and 94.61%, respectively, therefore, Sar2 and Sar1 isolates appeared at the extreme upper and lower part of the phylogenetic tree, and between them the third Sar3 isolate occurred. The inhibitory effect of the bacterial isolates understudy was also tested by the agar diffusion method, and the results showed that there was no inhibitory effect of these bacteria against the five pathogenic bacterial species: Staphylococcus aureus, Staphylococcus haemolyticus, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, and Pseudomonas aeruginosa. The three, diluted (200, 100, 50) mg/ml and undiluted, by the Agar Well Diffusion method, had varying inhibitory activity against the growth of pathogenic bacteria of its five types and were more influential on gram- positive compared to its negative effect on the stain. By detecting by GC-MS, the secondary metabolites of B. subtilis (Sar1) filtrate, which was selected because they are identical with a percentage of 98.19% to Bacillus subtilis bacteria contained in the standard GeneBank, they consisted of 33 chemical substances according to the number of peaks produced after injecting the filtrate into the GC, and when this information was entered into the MS, it was diagnosed by its names with the calculation of its molecular weight and the amount of space it occupies as a percentage within the filter used understudy. --- page 155 [OCR+] --- Molecular Characterization of Bacillus subtilis Isolated from Soil and Studing its Antibacterial Effect on Pathogenic Bacteria A Thesis Submitted By Sarah Salih Sulaiman Al-Rubaie To The Council of College of Education for Pure Science University of Mosul In Partial Fulfillment of Requirements for The Degree of M.Sc. In Biology Supervised by Assit.Prof. Dr. Najwa Ibrahim Khaleel Al-Barhawi 1443A. H. 2022A. D. [OCR of page] Molecular Characterization of Bacillus subtilis Isolated from Soil and Studing its Antibacterial Effect on Pathogenic Bacteria A Thesis Submitted By Sarah Salih Sulaiman Al-Rubaie To The Council of College of Education for Pure Science University of Mosul In Partial Fulfillment of Requirements for The Degree of M.Sc. In Biology Supervised by Assit.Prof. Dr. Najwa Ibrahim Khaleel Al-Barhawi 2022A. D. 1443A. H. --- page 156 [OCR+] --- University of Mosul College of Education for Pure Science Molecular Characterization of Bacillus subtilis Isolated from Soil and Studing its Antibacterial Effect on Pathogenic Bacteria Sarah Salih Sulaiman Mahmood Al-Rubaie M. Sc. Thesis Biology Supervised by Assit.Prof. Dr. Najwa Ibrahim Khaleel Al-Barhawi 1443A. H. 2022A. D. [OCR of page] University of Mosul 02 College of Education for SEES Pure Science peor a Molecular Characterization of Bacillus subtilis Isolated from Soil and Studing its Antibacterial Effect on Pathogenic Bacteria Sarah Salih Sulaiman Mahmood 41-1221 M. Sc. Thesis Biology Supervised by Assit.Prof. Dr. Najwa Ibrahim Khaleel Al-Barhawi 2022A. D. 1443A. H.

طلب نسخة من الملف

الملفات غير منشورة على الموقع. اترك بياناتك وسيتواصل معك موظفو قسم الشؤون الثقافية والفنون لإرسال النسخة مجاناً.

الاسم

رقم الهاتف

البريد الإلكتروني

الغرض من الطلب (اختياري)

إرسال الطلب