تأثير الصوم على بعض المتغيرات الكيموحيوية ودراسة جزيئية لإنزيم الليسيثين كوليستيرول أسايل ترانسفريز لمرضى السكر

الباحث

رغد عامر احمد الحيالي

المشرف

محمد عبد الهادي العبيدي - لمى عبد المنعم بكر

الجامعة

جامعة الموصل

الكلية / القسم

كلية التربية للعلوم الصرفة / قسم الكيمياء

الشهادة

دكتوراه

السنة

2023

لغة الرسالة

عربي

الكلمات المفتاحية

الصوم ; داء السكري ; إنزيم LCAT ; الكيمياء الحيوية

تضمنت هذه الدراسة البحث في فصلين: الفصل الأول تناول تأثير صيام شهر رمضان على مستوى بعض المتغيرات الكيموحيوية والنسبة المئوية للأحماض الدهنية لأشخاص مصابين بداء السكر بنوعيه الأول والثاني، وكذلك التعرف على تأثير عاملي العمر والجنس في مستوى هذه المتغيرات. تضمنت هذه الدراسة )110( عينة لأشخاص مرضى بداء السكر من النوعين الأول والثاني بدون صيام و(60) عينة لأشخاص اصحاء (مجموعة السيطرة) بدون صيام ومتابعة الاشخاص انفسهم بعد صيام رمضان Legs (20) dad من الذكور والاناث وبفئات عمرية مختلفة تتراوح ما بين (75-37) سنة لمرضى داء السكر من النوع الثاني وما بين(22-20) سنة لمرضى cla السكر من النوع الاول. إذ قدرت متغيرات الكاربوهيدرات(الكلوكوز، فحص سكر الدم التراكمي) ومؤشر ALS الجسم ومتغيرات الدهون (الكوليسترول الكلي، الدهون ASM كوليسترول البروتين الدهني عالي الكثافة، كوليسترول البروتين الدهني واطيء الكثافة، كوليسترول البروتين الدهني واطيء الكثافة clap الدهون الفوسفاتية، ونسبة Total Cholesterol / HDL-C ، ونسبة Triglyceride / HDL-C ونسبة LDL-C/HDL-C ، البروتين المرافق AT ، البروتين المرافق Bioo ، وأنزيم الليسيثين كوليسترول أسايل ترانس فريز)،الفيتامينات ومضادات الاكسدة (فيتامين D3 فيتامين GE الكلوتاثايون، المالوندالدايالديهايدء وانزيم باروكسونيز 2 (اريل استريز)) والعناصر المعدنية (الخارصينء الكوبلت,ء السيلينيوم، المغنيسيومء والكالسيوم) والمركبات البروتينية غير النيتروجينية (اليورياء الكرياتنين، حامض اليوريك) بإستخدام aac التحليل الجاهزة (Kits) وأظهرت هذه الدراسة نتائج تحليل وقياس النسبة Ay shall للأحماض الدهنية المشبعة والأحماض الدهنية غير المشبعة الاحادية والأحماض الدهنية غير المشبعة المتعددة في المكونات الدهنية لمصل الدم لأجزائه ADE (استر الكوليسترول، والدهون الثلاثية، والدهون الفوسفاتية) بإستخدام جهاز كروماتوغرافيا الغاز الشعري. الفصل الثاني من الدراسة تضمن تنقية جزئية ودراسة كيموحيوية جزيئية لأنزيم اللبسيثين كوليسترول أسايل ترانسفريز من مصل الدم لأشخاص يعانون من داء السكر من النوع الأول، وطبقت تقنيات عدة للتنقية ابتداء من الترسيب بكبريتات الامونيوم شم الفرز الغشائي فكروماتوغرافيا التبادل الايوني و أخيراً الهجرة الكهربائية. وتم التوصل إلى ان للانزيم متماثل واحدا واعلى فعالية كان مقدارها (11/501م17] casi LS, ،(328x10° النتائج على وجود حزمة منفردة عند تطبيق الهجرة الكهربائية على الانزيم المنقى من التبادل الايوني، وكان بوزن جزيئي تقريبي مقداره kDa) 68). واهتم هذا المحور بتوصيف الانزيم وامكانية تثبيطه بفعل الادوية (الكليمبيريد والاسبرين)، وكانت الدرجة الحرارية المثلى للأنزيم C%) 30)، ووجد أن الدرجة الحامضية المثلى للانزيم مقدارها )5.5( عند استخدام محلول البوتاسيوم داي فثاليت كمحلول منظمء وزمن الحضن الامثل .(20min) وتبين من النتائج أنه عند استخدام الكليمبيريد كان التثبيط من النوع التنافسي وبلغت اعلى نسبة تثبيط )%63.9( عند تركيز g/ml) 5(، وكذلك عند استخدام الاسبرين فقد كان التثبيط من النوع التنافسي أيضا وإن أعلى نسبة تثبيط بلغت )%29.1( عند تركيز ug/ml (5) من هذه المادة. بينت نتائج دراسة الجين المسؤول عن انزيم الليسيثين كوليسترول أسايل ترانسفريز للاكسون 4 واكسون 6 للمرضى المصابين بداء السكر من النوع الأول إذ تضمنت هذه الدراسة تقنيات عدة بدءا من استخلاص الحامض النووي (DNA) لدم مرضى داء السكر من النوع الأول ومجموعة السيطرة وقيست تراكيز ال (DNA) ونقاوته بإستخدام جهاز (Nano-dropspectrophotometric analysis) إذ أظهرت النتائج أن المعدل الكلي لتركيز dc pened DNA السيطرة بلغ 28/11 (30.17) اما مجموعة المرضى المصابين clay السكر من النوع الأول تركيز DNA لهم بلغ ng/pl (8.43). كما تم استخدام تقنية تفاعل البلمرة المتسلسل من خلال استخدام جهاز تفاعل البلمرة المتسلسل الكمي للوقت الفعلي إذ ظهرت حزم 1014 واضحة. وكذلك أظهرت نتائج التعبير الجيني وجود اختلافات معنوية في التعبير الجيني لأنزيم الليسيثين كوليسترول أسايل ترانسفريز وللاكسون 4 و6 عند مقارنة مجموعة مرضى داء السكر من النوع الأول مع مجموعة السيطرة وفي حالة الصيام لكلا المجموعتين .اختبرت نتائج المتسلسل GRT-PCR للنموذج رقم 4 لأنزيم الليسيثين كوليسترول أسايل ترانس فريز والتي تضمنت LCAT(Exon4) و LCAT(Exon6) بواسطة تقنية التسلسل المتعاقب ومقارنة النتائج للفئات المدروسة مع نتائج التسلسل المتعاقب للفئة الطبيعية لكل اكسون وقد تبين من خلال النتائج أن LCAT(Exon4) و LCAT(Exon6) اربعة أنواع من الطفرات المختلفة إذ تمثل الطفرات الاربعة جميعها من نوع (point mutation) وهي طفرات تحولية (Transversion) وانتقالية (Transition) وحذف (Deletion) وادخال (Insertions) وبمواقع مختلفة على الاكسونين، قد يكون لإحدى هذه الطفرات اثر في فعالية الانزيم نتيجة تغير الحوامض الامينيه في الموقع الفعال للأنزيم بالتالي تنخفض فعاليته.

A The study is included into in two chapters, the first chapter deals with the effect of Ramadan fasting on biochemical variables and the percentage of fatty acids in persons with type 1 and type 2 diabetes, as well as the effect of age and gender on the level of these variables. This study included (110) samples of patients with type 1 and type 2 diabetes who did not fast and (60) samples of healthy people (control group) who did not fast, as well as a follow-up on the same people after fasting (20) days of Ramadan, male and female, with ages between from 20 to 75 years old. Carbohydrate variables (glucose, glycosylated hemoglobin), body mass index, lipid variables (Total cholesterol, triglycerides, high- density lipoprotein cholesterol, low-density lipoprotein cholesterol, very low-density lipoprotein cholesterol, phospholipids, Total Cholesterol/HDL-C, Triglyceride/HDL-C, LDL-C, Apo AI, ApoB100, lecithin cholesterol acyltransferase enzyme), vitamins, antioxidants (vitamin D3, vitamin E, glutathione, malondialdehyde, paraoxonase 2 (aryl esterase), mineral zinc, cobalt, selenium, magnesium, calcium) and renal function (urea, creatinine, uric acid) using ready-made analysis number (Kits). The current study showed the results of analyzing and measuring the percentage of saturated fatty acids, monounsaturated fatty acids and polyunsaturated fatty acids in the fatty components of the blood serum for its three parts (cholesterol ester, triglycerides, and phospholipids) using a Chromatograph Gas Capillary. The second chapter of the study dealt with purifying and studying a partial of a molecular biochemical study of the enzyme lecithin cholesterol acyltransferase from the blood serum of people with type 1 diabetes. Several purification techniques were applied, starting with precipitation with ammonium sulfate, then dialysis, ion exchange B chromotography, and finally electrophoresis. It was concluded that the enzyme was identical and the highest activity was (328×10-3) unit/ml, and as the results showed on the presence of a single band when applying electrophoresis on the purified enzyme from ion exchange, it had an approximate molecular weight of (68) kDa . This axis was concerned with the description of the enzyme and the possibility of its inhibition by drugs (Glimepiride and aspirin), and the optimum temperature of the enzyme was (30°C), and it was found that the enzyme had an pH (5.5) when using potassium diphthalate solution as a buffer solution, and the optimum incubation time was (20) minutes . The results showed that when using Glimepiride, the inhibition was of the competitive type, and the highest percentage of inhibition was (63.9%) at a concentration of (5) μg/ml, while when using aspirin, the inhibition was of the competitive type as well, and the highest percentage of inhibition was (29.1%) when Concentration (5) μg/ml of this substance. This is was showed by the results of studying the gene which is responsible for the lecithin- cholesterol acyltransferase enzyme for exon 4 and exon 6 for patients with type 1 diabetes. The current study includes several techniques, starting with DNA extraction from the blood of patients with type 1 diabetes and the control group. The DNA concentrations and its purity were measured using a (Nano-drop spectrophotometric analysis), where the results showed that the total average of the DNA concentration for the control group was (30.17)ng/μl, while the group of patients with type 1 diabetes had a DNA concentration of (8.43) ng/μl. The polymerase chain reaction technology was also used, through the use of a quantitative real- time polymerase chain reaction, where clear DNA bands were cleared. Also, the results showed significant differences in the gene expression of the enzyme lecithin cholesterol acyltransferase and exon 4 and 6 when comparing the group of type 1 diabetes patients with the control group and in the fasting condition for both groups. The qRT-PCR results were tested for model No. 4 for the enzyme lecithin cholesterol acyl transferase, which included LCAT(Exon4) and LCAT(Exon6) by sequencing technique and comparing the results of the studied groups with the sequencing results of the natural category for each exon. Through the results LCAT (Exon4) and LCAT (Exon6) showed that four types of the different mutations represent all mutations of type (Point mutation), which are (Transversion), (Transition), (Deletion) and (Insertions) at different sites on the exons. One of these mutations may have an effect on the enzyme's activity as a result of changing the amino acids in the active site of the enzyme, thus decreasing its effectiveness. --- page 262 [OCR+] --- University of Mosul College of Education For Pure Science Fasting Effect on some biochemical parameters and molecular study of lecithin cholesterol acyltransferase for Diabetics Raghad Amer Ahmed Al-Hayali Ph.D. Thesis Chemistry Supervised By Assist. Prof. Dr. Mohammed Abd AL-hadi Al-obaidy Assist. Prof. Dr. Luma Abd Almunim baker A.D 2023 A.H 1444 [OCR of page] University of Mosul me) College of Education i) ids For Pure Science 9-22 Fasting Effect on some biochemical parameters and molecular study of lecithin cholesterol acyltransferase for Diabetics Raghad Amer Ahmed Al]-Hayali Ph.D. Thesis Chemistry Supervised By Assist. Prof. Assist. Prof. Dr. Mohammed Abd AL-hadi Al-obaidy Dr. Luma Abd Almunim baker A.D 2023 A.H 1444 --- page 263 [OCR+] --- Fasting Effect on some biochemical parameters and molecular study of lecithin cholesterol acyltransferase for Diabetics A Thesis Submitted By Raghad Amer Ahmed Al-Hayali To The Council of the College of Education for Pure Science University of Mosul In Partial Fulfillment of the Requirement For the Degree of Ph.D. In Chemistry Supervised By Assist. Prof. Dr. Mohammed Abd AL-hadi Al-obaidy Assist. Prof. Dr. Luma Abd Almunim baker A.D 2023 A.H 1444 [OCR of page] Fasting Effect on some biochemical parameters and molecular study of lecithin cholesterol acyltransferase for Diabetics A Thesis Submitted By Raghad Amer Ahmed Al]-Hayali To The Council of the College of Education for Pure Science University of Mosul In Partial Fulfillment of the Requirement For the Degree of Ph.D. In Chemistry Supervised By Assist. Prof. Assist. Prof. Dr. Mohammed Abd AL-hadi Al-obaidy Dr. Luma Abd Almunim baker A.D 2023 A.H 1444

طلب نسخة من الملف

الملفات غير منشورة على الموقع. اترك بياناتك وسيتواصل معك موظفو قسم الشؤون الثقافية والفنون لإرسال النسخة مجاناً.

الاسم

رقم الهاتف

البريد الإلكتروني

الغرض من الطلب (اختياري)

إرسال الطلب