تثبيط انزيمات الضراوة المنتجة من بكتريا العنقوديات الذهبية المعزولة من مصادر مختلفة

الباحث

امنة يعرب حميد عبدالله البكري

المشرف

محسن أيوب عيسى أحمد العكيدي

الجامعة

جامعة الموصل

الكلية / القسم

كلية العلوم / قسم علوم الحياة

الشهادة

ماجستير

السنة

2022

لغة الرسالة

عربي

الكلمات المفتاحية

العنقوديات الذهبية ; انزيمات الضراوة ; التثبيط ; الأحياء المجهرية

اجريت الدراسة الحالية بهدف التحري عن انزيمات عوامل الضراوة التي تمتلكها بكتريا المكورات العنقودية الذهبية Staphylococcus aureus وإمكانية تثبيط هذه الانزيمات باستخدام المستخلصات الكحولية والزيوت الأساسية لعدد من النباتات والتحري عن حصول التثبيط على المستوى المظهري والجزيئي، جمع لهذا الغرض 65 عينة خلال الفترة من شهر تشرين الأول 2021 إلى غاية شهر كانون الاول 2021، توزعت بين مصادر مرضية )50 عينة Glad عينات add ادرار، مسحات جلدية ودم) ومصادر بيئية )15 عينة شملت cle dai cle وهواء) اجريت عليها الفحوصات التشخيصية المجهرية والزرعية الكيموحيوية اللازمة فضلاً عن التشخيص بجهاز الفايتك ،Vitek2 كما درس Gre مقاومتها للمضادات الحيوية المختلفة. تم الحصول على (20) عزلة بكتيرية من كافة العينات المدروسة تابعة إلى المكورات العنقودية الذهبية وبنسبة عزل بلغت %100 توزعت بين 13 عزلة )%65( من مصدر مرضي و7 عزلات )%35( من مصدر بيئي. هذه العزلات جميعاً أظهرت حساسية مطلقة لكل من مضادات أميكاسين، جينتامايسين، نيتروفيورانتوين، فانكومايسين بنسبة 100 وبنسب أقل لبقية المضاداتء بالمقابل أظهرت النتائج أن هناك تبايناً في نسبة مقاومة العزلات تجاه المضادات التالية الأريثرومايسين بنسبة 9055: الأمبيسيلين 6445 التتراسيكلين 40؟؛ وتدرجت في مقاومتها بنسب أقل لبقية المضادات المدروسة. أوضحت النتائج ان جميع العزلات المدروسة باختلاف مصادر عزلها كانت منتجة لانزيمات الضراوة ( مابين 2- 6 انزيمات ) بما فيها العزلات البيئية وقد تباينت نسب انتاج كل نوع من انزيمات الضراوة من قبل العزلات كانت أعلى نسبة انتاج لكل من إنزيم الليسيثينيز والليبييز بنسبة 7695: بينما كانت 90, من العزلات date لإنزيم البروتييز وإنزيم اليوريز بنسبة 780 ثم الهيمولاسين بنسبة S60 واخيراً بيتا لاكتاميز بنسبة 9055. انتخبت في الدراسة الحالية خمسة نباتات وهي نبات القرفة والزنجبيل والنعناع وقشور الرمان ويذور العنب للتحري عن قدرة مستخلصاتها الكحولية وزيوتها الأساسية في تثبيط انزيمات الضراوة المدروسة وتم تحديد قيم التراكيز المثبطة الدنيا MIC وتحت المثبطة الدنيا Sub-MIC لهذه الزيوت والمستخلصات وبينت نتائج اختبارات التثبيط المظهري ان زيت القرفة أظهر تثبيطاً على انزيمي الليسيثينيز والليبيز واليوريزء أما المستخلص الكحولي للقرفة فقد ثبط انزيمات الهيمولاسين والبيتا لاكتاميز والليبيزء واظهر Guy النعناع تثبيطا لكل من انزيم هيمولاسين والبروتييز والليبيز بينما مستخلصه الكحولي bs انزيمي الليسيثينيز والبروتييز، اما المستخلص الكحولي لقشور الرمان فقد ثبط انتاج انزيمي البروتييز والليسيثينيز والهيمولاسينء بينما ثبط زيته انتاج البروتييزء كما كان للمستخلص الكحولي للزنجبيل تأثيز تثبيطي في انزيمي الهيمولاسين والليبيزء وثبط زيت بذور العنب انتاج انزيم البروتييز فقط . اختيرت جينات ثلاثة انزيمات ضراوة كانت الاكثر عرضة للتثبيط في اختبارات التثبيط المظهري AIA 5 لدراسة تثبيطها على المستوى الجزيئي شملت الجين 5/07 المشفر لانتاج انزيم بيتا لاكتاميز المشفر لانتاج انزيم الهيمولاسين و 121,1102/ المشفران لانتاج انزيم الليبيز، بينت نتائج التحري الجزيئي فلم يكن موجودا lip] الكروموسومي لكافة العزلات المدروسة عدا الجين DNA عنها انها موجودة على في أحدى العزلات. اظهرت نتائج التثبيط الجزيئي ان المعاملة باستخدام زيت القرفة ادى إلى اختفاء يؤثر aly ،opal Abe في جميع العزلات أما 02:/ فقد اختفى في أحدى العزلات وظهر في lip] الجين فقد اختفى في أحدى AIA مستخلص القرفة الكحولي في الجين 5/02 المشفر لانزيم بيتا لاكتاميز أما المعاملة بالمستخلص الكحولي لقشور الرمان إلى اختفاء الجين Gal LS العزلات وظهر في عزلة أخرىء في العزلات المدروسة؛ دلالة على أن التثبيطا حصل على المستوى الجزبئي. 4

A The current study was conducted with the aim of investigating the virulence factors enzymes possessed by Staphylococcus aureus and the possibility of inhibiting these enzymes by using alcoholic extracts and essential oils of some plants and investigating this inhibition at the phenotypic and molecular level. For this purpose, 65 samples were collected during the period from October 2021 until December 2021, distributed between pathologenic sources (50 samples that included sputum samples, urine, skin and blood swabs) and environmental sources (15 samples that included soil, water and air) microscopic, cultural and biochemical diagnostic tests were conducted as well as the diagnosis with Vitek2 system. isolates resistance to various antibiotics also studied. Twenty bacterial isolates were obtained from all studied samples belonging to S. aureus with an isolation rate of 100%, distributed between 13 isolates (65%) from a pathologenic source and 7 isolates (35%) from an environmental source. All of these isolates showed highly sensitivity to amikacin, gentamicin, nitrofurantoin, and vancomycin at 100% and lower rates than the rest of the antibiotics. In contrast, there was a discrepancy in the percentage of isolates resistant to erythromycin by 55%, ampicillin 45%, tetracyclines 40%, and in lower resistance rates to the rest studied antibiotics. The results showed that all studied isolates, were producers of virulence enzymes (between 2-6 enzymes), including environmental isolates. The production rate of each type of virulence enzymes varied by the isolates, and the highest production rate was for lecithinase and lipase by 95%, while 90% of the isolates produced protease and urease by 80%, then hemolysin by 60%, and finally beta-lactamase by 55%. Five plants were selected in the current study, which is cinnamon, ginger, mint, pomegranate peels and grape seeds to investigate the ability of their alcoholic extracts and essential oils to inhibit the studied virulence enzymes. B Cinnamon oil showed inhibition of lecithinase, lipase and urease enzymes, while the alcoholic extract of cinnamon inhibited hemolysin, beta-lactamase and lipase, and peppermint oil showed inhibition of both hemolysin, protease and lipase, while its alcoholic extract inhibited lecithinase and proteolytic. For pomegranate peels, the production of protease enzymes, lecithinase and hemolysin were inhibited, while its oil inhibited the production of protease, and the alcoholic extract of ginger had an inhibitory effect on hemolysin and lipase, and grape seed oil inhibited the production of protease only. The genes of three virulent enzymes that were most likely inhibited in the phenotypic inhibition tests, were selected to study their inhibition at the molecular level, they included blaZ gene, which encodes for the production of beta-lactamase, and hlA, which encodes for the production of hemolysin, and lip1, lip2, which encodes for the production of lipase. All studied genes were exist at the chromosomes of all studied isolates except lip1 gene was not present in one of the isolates. The results of molecular inhibition showed that treatment with cinnamon oil led to the disappearance of the Lip1 gene in all isolates, while Lip2 disappeared in one isolate and appeared in another. The alcoholic cinnamon extract did not affect blaZ gene while hlA disappeared in one isolate and appeared in another, and treatment with the alcoholic extract of pomegranate peel led to the disappearance of the hlA gene in the studied isolates, indicating that the inhibition occurred at the molecular level.

طلب نسخة من الملف

الملفات غير منشورة على الموقع. اترك بياناتك وسيتواصل معك موظفو قسم الشؤون الثقافية والفنون لإرسال النسخة مجاناً.

الاسم

رقم الهاتف

البريد الإلكتروني

الغرض من الطلب (اختياري)

إرسال الطلب