التوصيف الجزيئي للجينين ply و hlyA في جرثومة Streptococcus pneumoniae المعزولة من عينات سريرية في مدينة الموصل

الباحث

رؤى عامر ثامر صالح العبيدي

المشرف

اميرة محمود محمد الراوي

الجامعة

جامعة الموصل

الكلية / القسم

كلية العلوم / قسم علوم الحياة

الشهادة

ماجستير

السنة

2022

لغة الرسالة

عربي

الكلمات المفتاحية

المكورات الرئوية ; جين ply ; التوصيف الجزيئي ; العينات السريرية

أولت الدراسة الحالية اهتماماً بالتحري عن جرثومة - Streptococcus pneumoniae (S.pneumoniae_ ( من عينات القشع التي شملت عينة من المرضى الوافدين والراقدين في المستشفيات (مستشفى السلام ومستشفى ابن سينا) المصابين بالتهابات الجهاز التنفسي السفلي وبشكل اكثر وضوحاً شملت الدراسة عزل جرثومة S pneumoniae وتشخيصها باستخدام طرائق الزرع الروتينية واختبار حساسية الاوبتجين والفحص المجهري وتم ash تشخيصها باستخدام تقنية الفايتيك2 إذ بلغت نسبة عزلات الجرثومة 10 (5عزلات). وتم عزل الجراثيم الاخرى وتشخيصها من عينات القشع حيث عزلت الجرائيم الموجبة لصبغة كرام Micrococcus 3 Staphylococcus aureus luteus و Staphylococcus hominis بنسب بلغت %40 5 %30 و2 % على التوالي ، في حين عزلت انواع سالبة لصبغة كرام التي شملت Escherichia coli و Pseudomonas 40 وبنسبة %6 و9662 على التوالي. تناولت الدراسة أيضاً التحري عن انتاج الجرثومة للنيمولايسين بثلاث طرائق شملت طريقة اكار ثنائي الطبقة وطريقة الخط المتعامدء وطريقة الانتشار بحفر الاكار وبينت النتائج قابلية عزلات جرثومة S.pneumoniae على انتاج النيمولايسين إذ كانت طربقة الأكار ثنائي الطبقة الاكفأ من بين الطرائق المستخدمة .واختبرت قابلية النيمولايسين المنتج في تثبيط جرثومة 5لا5.41/7 و E.coli فيما لم ay فعالية في تثبيط جرثومة P.mirabilis . وأثبتت النتائج قدرة الجرثومة على افراز الهيمولايسين مما ينتج عنه تحلل كامل النوع (بيتا) لكريات الدم الحمراء في وسط اكار الدم تضمنت الدراسة في الجانب الجزيئي التحري عن جينات hlyss ply باستخدام تقنية تفاعل البلمرة التسلسلي Polymerase Chain Reaction (PCR) واظهرت النتائج ان عزلات جرثومة Spa S.pneumoniae الجين ply بنسبة )%60( والجين 77225 بنسبة )%80( . وأجري التحليل التتابعي لكلا الجنينين ، واظهرت نتائج التحليل التتابعي للنيوكليوتيدات وجود تباين بين العزلات على مستوى الجين للجنينين كليهما بظهور طفرات نقطية كما واظهرت العلاقة التطورية بين العزلات اعتماداً على الجين ply نسبة تطابق 99؟ في حين ابدت اعتماداً على الجين Alys نسبة تطابق 8 مقارنة مع العزلات العالمية المسجلة في موقع 710131. كما تناولت الدراسة في as! جوانبها التحري عن مقاومة جرثومة S.pneumoniae لبعض المضادات الحيوية إذ اظهرد 5 العزلات الجرثومية مقاومة بشكل شديد للعلاج بالمضاد الحيوي AK (Amikacin) بنسبة %100 Let اظهرت مقاومة اقل تجاه العلاج بالمضادات CIP CTX (Cefotaxime) 5 (Ciprofloxacin) وينسبة %60، واظهرت نسبة مقاومة %40 تجاه CAZ ;(DO Doxycyclin) من JS نسبة %20 تجاه 8 (Erythromycin) المضاد AZM و AK (Amikacin) و (CN Gentamicin) و CRO (Ceftrixone) و (Ceftazidime) (Azithromycin) وتضمن المحور الأخير من الدراسة التحري عن قابلية بعض المستخلصات النباتية والأعشاب إذ اظهر المستخلص الكحولي لبذور السفرجل فعالية Spneumoniae الطبية على تثبيط جرثومة تثبيطية ضد الجرثومة في حين لم يظهر مستخلص ثمرة السفرجل وأوراق الآس والقهوة الخضراء أي قابلية في تثبيط الجرثومة.

A The current study paid attention to investigation of Streptococcus pneumoniae from sputum specimens, which included 50 specimens of incoming and outgoing patients with respiratory infections in some hospitals of Mosul city . More clearly, the study included isolation and identification of S.pneumoniae using routine culture methods, optochin sensitivity and microscopy examination and their identification was confirmed using Vitek2 technique, where the percentage of bacteria isolates reached 10% (5 isolates). Also, other bacteria were isolated and identification from sputum specimens, where Gram-positive bacteria Staphylococcus aureus, Micrococcus luteus and Staphylococcus hominis were isolated at rates of ( 40%),( 30% )and( 2%), respectively, while Gram-negative species were isolated, including Escherichia coli and Pseudomonas aeruginosa, with percentages of( 6%) and (2%). The study also deals with the phenotypical investigation of the bacterial production of pneumolysin by three methods including the agar double layer method, the cross line method, and the agar pits diffusion method. The double-layer agar method was the most efficient among the methods used. The ability of the produced pneumolysin to inhibit types of Gram-positive and Gram-negative bacteria was tested, and it showed effectiveness in inhibiting S.aureus and E.coli, while it was not effective in inhibiting P. mirabilis. The study also focused on the investigation of hemolysin and the ability of bacterium to produce it. On the molecular side, the study included the detection of the ply and hlys genes using the PCR Polymerase Chain Reaction technique. The results showed that the isolates of S.pneumoniae contain the ply gene (60%) and the hlys gene (80%). sequence analysis was conducted for both genes. The results of the nucleotide sequence analysis were variable between the isolates at the level of the gene and for both genes, as this was indicated by the appearance B of point mutations. The evolutionary relationship between the isolates depending on the ply gene showed a 99% match, while it showed a 98% match with the global isolates recorded on the NCBI. The study also deals with an aspect of investigating the resistance of S.pneumoniae to some antibiotics, where isolate S1 showed strong resistance at 100%, isolate S2 at 75%, isolate S3 66.6%, and isolates S4 and S5 showed resistance at 58.3% to the antibiotics used in the study (CIP Ciprofloxacin), CTX (Cefotaxime) E (Erythromycin) DO (Doxycyclin) CAZ (Ceftazidime) CRO (Ceftrixone), CN (Gentamicin), AK (Amikacin), AZM (Azithromycin). The last part of the study included investigating the ability of some plant extracts and medicinal herbs to inhibit the bacterium S.pneumoniae, where the alcoholic extract of quince seeds showed an inhibitory activity against the bacterium, while the extract of quince fruit, myrtle leaves and green coffee did not appear any inhibitory effect on bacterial growth.

طلب نسخة من الملف

الملفات غير منشورة على الموقع. اترك بياناتك وسيتواصل معك موظفو قسم الشؤون الثقافية والفنون لإرسال النسخة مجاناً.

الاسم

رقم الهاتف

البريد الإلكتروني

الغرض من الطلب (اختياري)

إرسال الطلب