دراسة إنزيم بيروكسي ردوكسين 3 لدى مرضى الإجهاض التلقائي بأنواعه الستة وعلاقته بالمتغيرات الكيموحيوية والعوامل المؤثرة عليه مع عزله من مصل الدم

الباحث

اسراء حكمت يونس مجيد الحمداني

المشرف

لؤي عبد علي الهلالي

الجامعة

جامعة الموصل

الكلية / القسم

كلية العلوم / قسم الكيمياء

الشهادة

دكتوراه

السنة

2023

لغة الرسالة

انكليزي

الكلمات المفتاحية

Peroxiredoxin 3 ; Spontaneous Abortion ; Biochemical Parameters ; Enzyme Isolation

يعد الإجهاض (الاسقاط) من اهم المضاعفات التي تواجه الحمل لما له من تأثير سلبي على العديد من النواحي الجسدية والنفسية ولكثرة الملوثات البيئية ونمط الحياة غير الصحي المنتشر في وقتنا الحالي وبالنظر لتزايد اعداد حالات الإجهاض فقد سلطنا الضوء في هذه الدراسة على المسببات المحتملة وعلاقتها بالأنواع المختلفة للإجهاض. تضمنت هذه الدراسة قياس مستوى انزيم البيروكسي ردوكسين 3 (Prx3) في مرضى الإجهاض التلقائي والمشخص Lys والمصنف الى 6 انواع من الإجهاض والمتضمنة: الإجهاض المهددء الإجهاض الحتمي، الإجهاض غير الكامل، الإجهاض الكامل؛ الإجهاض المنسيء والإجهاض المتكررء بالإضافة إلى تقدير (31) متغيرا كيموحيوي والتي شملت: هورمون البروجسترون ،(P4) الاجسام المضادة للدهون الفوسفاتية(321)، الاجسام المضادة للدهون القلبية (3001)؛ وبعض المعادن الاساسية والسامة، بالإضافة الى بعض انزيمات الكبد ومؤشرات الاكسدة ومضاداتها والكلوكوزء وصورة الدهون الكاملة وبعض البروتينات. اجريت هذه الدراسة على )270( مشاركة في سن الانجاب: )120( امرأة مصابة بالإجهاض التلقائي، )40( من النساء الاصحاء غير الحوامل و (40) من النساء الاصحاء الحوامل، بالإضافة الى (70) عينة لعزل إنزيم Prx3 من النساء الأصحاء ظاهريا غير الحوامل وليس لديهم تاريخ إجهاض سابقء تم تقسيم الدراسة إلى ثلاثة أجزاء رئيسية على النحو التالي: الجزء الأول (الدراسة السريرية): تضمنت هذه الدراسة تقدير مستوى إنزيم Prx3 في مصل pall لدى مرضى الإجهاض التلقائي والنساء غير الحوامل والحوامل الاصحاء ظاهرياء أظهرت النتائج وجود انخفاض معنوي في مستوى 2:23 في مرضى الإجهاض التلقائي مقارنة مع مجموعة الاصحاء الحوامل وغير الحوامل؛ وبصورة ممائلة كان الانخفاض معنويا لل Prx3 في كل من المجاميع الستة للإجهاض التلقائي واقل قيمة وجدت Gal مرضى الإجهاض الحتمي. كما وتأثر مستوى Prx3 بتقدم عمر الحمل وزيادة عدد مرات الحمل aly يظهر اي تأثير مع تقدم عمر الام والتاريخ الوراثي للعائلة وعدد الإجهاضات السابقة في مجموعة المرضى. اظهرت نتائج المقارنة بين مجموعتي مرضى الإجهاض والاصحاء غير الحوامل للمتغيرات الكيموحيوية ارتفاعا معنويا في مستويات aCL 5 aPL 5 P4 والمعادن السامة (الزرنيخ (As) والكادميوم (Cd) والزئبق (Ag) وانزيم اسبارتيت امينوترانسفيريز (AST) ومؤشرات الاكسدة (بيروكسي نيتريت (ONOO-) ومالوندايالديهايد ((MDA) والكوليستيرول الكلي (TC) والبروتين الدهني الواطئ الكثافة للكوليستيرول (LDL-C) والالبومين (416)، بينما اظهرت مستويات المعادن الاساسية (الكالسيوم (Ca) والفسفور اللاعضوي ((P) والكلوتاثايون (GSH) انخفاضا معنويا. كما اظهرت نتائج المقارنة بين مجموعتي مرضى الإجهاض والاصحاء الحوامل للمتغيرات الكيموحيوية ارتفاعا معنويا في مستويات ACL 5 aPL والحديد والمعادن السامة (Hes Cds AS) وانزيمات الكبد ) ALT AST ونسبة (ALT/AST ومؤشرات الاكسدة (MDA 5 ONOO-) وحامض اليوريك (UA) والبليروبين (TB) ASN والكلوكوز (Glu) والبروتين (TP) 1S والالبومين (Alb) والكلوبيولين Lain (Glo) اظهرت مستويات 24 والمعادن الاساسية (P.5 Ca) وانزيم الفوسفاتيز القاعدي GSH 5 (ALP) والكليسيريدات الثلاثية VLDL-C 5 (TG) انخفاضا معنويا. بالإضافة الى ذلك تم دراسة تأثير عمر الحمل في مرضى الإجهاض واظهرت النتائج ارتفاعا معنويا في مستويات 24 وصورة الدهون الكاملة (LDL-C 5 HDL-C 5 TC) في مصل دم مرضى الإجهاض مع aati عمر coal) لكن مستويات المعادن الاساسية Cas Fe) ونسبة Hg 5 )2 /Ca و0511 UAs و TP Alb s اظهرت انخفاضا معنويا. اشارت النتائج ارتفاع مستوى 24 5 VLDL-C5 TGs ALP في دم مرضى الإجهاض الذين يملكون تاريخ عائلي وراثي في الإجهاضء بينما المتغيرات الكيموحيوية الاخرى لم تظهر اختلافات معنويا. كذلك تم دراسة تأثير عمر الام لدى مرضى الإجهاض واظهرت النتائج ارتفاعا معنويا في مستويات aCL والحديد ونسبة ONOO-s ALT; As P/Ca وصورة الدهون الكاملة TC) و16 و LDL-C و Glos ) VLDL-C لدى مرضى الإجهاض مع تقدم عمر الام ولوحظ انخفاضا معنويا في مستويات P .Albs GSH بالإضافة الى ذلك اظهرت النتائج ارتفاعا معنويا في مستويات aCLs aPL والمعادن السامة(85. 5 ALT 5 (Hg 5 Cd ونسبة ALT/AST ومؤشرات الاكسدة(-01700 5 (MDA و 18 و18 Glos في مرضى الإجهاض مع زيادة ase الإجهاضات السابقة، لكن مستوى GSH اظهر انخفاضا معنويا. وبصورة مماثلة تم دراسة تأثير زيادة عدد مرات الحمل لدى مرضى الإجهاض واظهرت النتائج ارتفاعا معنويا في مستويات,3)01 5 Fe ونسبة AST 5 Hg 5 As 5 P/Ca ومؤشرات الاكسدة (MDA 5 ONOO-) Glo, Glus IB 5 TBs UA; في مرضى الإجهاض مع زيادة عدد مرات ،heal ولوحظ انخفاضا معنويا في مستويات 2 و6511. كشفت تأثير انواع الإجهاض عن ارتفاعا معنويا في نسبة ALT 5 Ca/P في الإجهاض المهدد وانخفاضا معنويا في مستوى . كما اظهرت نتائج aPL sTB ارتفاعا معنويا في الإجهاض الحتمي. سجل UA ارتفاعا معنويا في الإجهاض غير الكاملء، بينما سجل HLD-C 5 TGs P4 انخفاضا معنويا. ولوحظ ارتفاعا معنويا في مستوى Glu في الإجهاض الكامل. كما لوحظ ارتفاعا معنويا في AS AST; في الإجهاض المنسيء بينما اظهر مستوى GSH انخفاضا معنويا. سجلت,321 5 Fey aCL و60 He 5 ومؤشرات الاكسدة(-07100 5 TP, (MDA و010 ارتفاعا معنويا في الإجهاض المتكرر. سجل الإجهاض المتكرر كأكثر انواع الإجهاض تأثيرا وخصوصا في مؤشرات الكرب التأكسدي والمعادن السامة. اوضحت النتائج ان هناك ارتباط إيجابي لمستوى Prx3 مع كل من ،Alb STP 5 UA 5 GSH ولكنه اظهر ارتباطًا سلبياً مع As ومؤشرات الاكسدة(-07100 5 (MDA ومعامل تصلب الشرايين في مجموعة الإجهاض . الجزء الثاني (دراسة العزل) : تضمن عزل والتنقية الجزيئية لإنزيم Prx3 من مصل دم النساء الاصحاء ظاهريا غير الحواملء باستخدام تقنيات حيوية مختلفة، والتي تضمنت الترسيب بكبريتات الامونيوم بنسبة 65 % والديلزة وكروماتوكرافيا التبادل الايوني، حيث تم فصل قمة واحدة ذات فعالية عالية بواسطة تقنية التبادل الايوني -DEAE السليلوزء وبعدد مرات التنقية تصل الى 40 مرة. ومن ثم الترشيح الهلامي باستخدام 0-50 Sephadex ، وقد وجد أن هناك قمة واحدة ذات فعالية عالية من 223 ، وبلغ عدد مرات التنقية للقمة 77 مرة وبنسبة استعادة البروتين 37.5 90. بالإضافة الى ذلكء تم ايجاد الوزن الجزيئي التقريبي لل Prx3 المعزول (Gull, جزئيا من مصل caall وقد كان بحدود (26187.8) دالتون لقمة واحدة باستعمال تقنية كروماتوكرافيا الترشيح الهلامي (Sephadex G-50) وظهور حزمة واحدة باستعمال تقنية الهجرة الكهربائية نوع SDS-PAGE مع الوزن الجزيئي (22031.3) دالتون. الجزء الثالث (دراسة تأثير المركبات الكيميائية والادوية على (Prx3 تضمن دراسة تأثير بعض OLS pall الكيميائية والأدوية العلاجية على 5523: اظهرت النتائج انخفاضا في مستوى Prx3 في وجود )5 ملي مول) من كلوريد الكادميوم وكلوريد الكوبلت وكلوريد النحاس وكلوريد الرصاص واوكسيد المنغنيز وكلوريد الزئبق وكلوريد النيكل وسيانيد البوتاسيوم ونترات الفضة. وأعلى نسبة تثبيطية وجدت عند كلوريد الزئبق وسيانيد البوتاسيوم وكلوريد الربصاص. hel تأثير الأدوية نسب تنشيطية وتثبيطيه مختلفة، اذ أظهرت النتائج ارتفاعا في مستوى 2523 في وجود (5 ملي مول) من حامض الاسكوربيك والثيامين، بينما وجد هناك انخفاضا عند وجود الاسيتامينوفين والأموكسيسيلين والازثرومايسين والسيفالاكسين والايبوبروفين وحامض الميفيناميك والتتراسيكلين وان أعلى نسبة تثبيطية وجدت عند حامض الميفيناميك والايبوبروفين.

Abortion (Miscarriage) is one of the most important complications facing pregnancy and as a result of its negative impact on many physical and psychological aspects as well as the large number of environmental pollutants and the unhealthy lifestyle prevalent in recent times in addition to the increasing number of cases of abortion, we have highlighted in this study the possible causes and their relationship to the different types of abortion. This study involves the measurement of Peroxiredoxin 3 (Prx3) in spontaneous abortion patients. The patients in the recent study were clinically diagnosed and sorted into six types of abortion: Threaten abortion, Inevitable abortion, Incomplete abortion, Complete abortion, Missed abortion, and Recurrent abortion, in addition to determination for (31) biochemical parameters which include: Progesterone hormone (P4), Antiphospholipid antibodies (aPL), Anticardiolipin antibodies (aCL); and some Essential and Toxic metals, beside of, some Liver Enzymes with Oxidant and Antioxidant biomarkers, Glucose (Glu.), Lipid profile and some Proteins. The present study has been performed on (270) participants of childbearing age: (120) women with spontaneous abortion, (40) healthy non-pregnant women, (40) healthy pregnant women, in addition to (70) samples used for isolation Prx3 enzyme from apparently healthy non-pregnant women with no previous history of abortion. The study was divided into three main parts as follows: First part (Clinical Study): This study involved determining the level of Prx3 enzyme in the blood serum of patients with spontaneous abortion, apparently healthy pregnant and non-pregnant women. The results exhibited a significant decrease in the Prx3 level in spontaneous abortion patients as compared with the healthy pregnant and non-pregnant groups; similarly, there was a significant decrease in the level of Prx3 in each six types of spontaneous abortion with the lowest value found in inevitable abortion patients. The level of Prx3 enzyme was also affected by advancing gestational age and with an increased number of pregnancies, whereas not affected by progressing maternal age, family history, and number of previous abortion in patients group. The results of the comparison between the abortion patients and healthy non- pregnant groups for biochemical parameters showed a significant increase in the levels of P4, aPL, aCL, toxic metals (Arsenic (As), Cadmium (Cd), Mercury (Hg)), Aspartate aminotransferase (AST), oxidant markers (Peroxynitrate (ONOO-), Malondialdehyde (MDA)), Total cholesterol (TC), Low density lipoprotein- Cholestrol (LDL-C) and albumin (alb.), whereas the levels of essential metals (Calcium (Ca), inorganic phosphorus (P)) and glutathione (GSH) showed a significant decrease. The results of the comparison between the abortion patients and healthy pregnant groups for biochemical parameters also showed a significant increase in the levels of aPL, aCL, Fe, toxic metals (As, Cd, Hg), liver enzymes (AST, ALT, AST/ALT ratio), oxidant markers (ONOO-, MDA), UA, TB, Glu., TP, Alb., and Glo., whereas the levels of P4, essential metals (Ca, P), ALP, GSH, TG, and VLDL-C showed a significant decrease. Additionally, the effect of gestational age was studied among the abortion patients, the results exhibited a significant increase in the levels of P4, and lipid profile (TC, HDL-C, LDL-C) in the blood serum of abortion patients with progression gestational age, but the levels of essential metals (Fe, Ca, Ca/P ratio), Hg, GSH, UA, TP, and Alb. showed a significant decrease. The present findings indicated higher levels of P4, ALP, TG, and VLDL-C in the blood of abortion patients having a family history of abortion, but other biochemical parameters exhibited not significant differences. Also, the effect of the mother’s age was studied among abortion patients and the results exhibited a significant increase in the levels of aCL, Fe, Ca/P ratio, As, ALT, ONOO-, lipid profile (TC, TG, LDL-C, VLDL-C) and Glo. for abortion patients with progression of maternal age, and a significant decrease in the levels of P, GSH and Alb. In addition, the current results exhibited a significant increase in the levels of aPL, aCL, toxic metals (As, Cd, Hg), ALT, AST/ALT ratio, oxidant markers (ONOO-, MDA), TB, IB, and Glo. in abortion patients with increasing No. of previous abortion, but the level of GSH was observed a significant reduction. Similarly, the gravida impact was studied among the abortion patients and the results showed a significant increase in the levels of aCL, Fe, Ca/P ratio, As, Hg, AST, oxidant markers (ONOO-, MDA), UA, TB, IB, Glu., and Glo. in the blood serum of abortion patients with an increasing number of pregnancies, and a significant decrease in the levels of P and GSH was noticed. The abortion type’s impact displayed a significant elevation of Ca/P ratio and ALT was shown in threaten abortion, and a significant reduction in P level. The result of TB and aPL revealed a significant increase in an inevitable abortion. UA level recorded a significant elevation in an incomplete abortion, while P4, TG and HDL-C showed a significant reduction. A significant increase of Glu. level was noticed in a complete abortion. A significant elevation of As and AST was observed in missed abortion, and a significant reduction in the level of GSH. The aPL, aCL, Fe, Cd, Hg, oxidant markers (ONOO-, MDA), TP, and Glo., levels demonstrated a significant elevation in recurrent abortion. The most type of abortion affects was detected in the recurrent spontaneous abortion, especially in oxidative stress markers and toxic metals. The result exhibited a positive correlation of Prx3 level with each of GSH, UA, TP, and Albumin, whereas a negative correlation was revealed with As, oxidant markers (ONOO-, MDA) and AI in abortion group. Second part (Isolation Study): It involves isolation and partial purification of the Prx3 from the blood serum of apparently healthy non-pregnant women using various biotechniques, which include sedimentation with 65% ammonium sulfate, dialysis, and ion exchange chromatography, where only one highly activity main peak is separated by the DEAE-cellulose ion exchange technique, and the number of purification reaches 40 times. Concerning the gel filtration by using Sephadex G-50, it has been found that there was one peak with high activity of Prx3, and the number of purification times for the peak reached 77 times and the percentage of protein recovery was 37.5 %. In addition, the approximate molecular weight of Prx3 isolated and partially purified from serum was (26187.8) Dalton of one peak using gel filtration chromatography (Sephadex G-50), while one band was appeared using SDS-PAGE technique with molecular weight (22031.3) Dalton. Third part (Effect of Chemical Compounds & Drugs on Prx3 Study) : It involves the study effect of some chemical compounds and therapeutic drugs on Prx3. The results exhibited a decrease in Prx3 level in the presence of (5 mM) for Cadmium chloride, Cobalt chloride, Copper chloride, Lead chloride, Manganese oxide, Mercuric chloride, Nickel chloride, Potassium cyanide, and Sliver nitrate, with the highest inhibitory percentage was found in Mercuric chloride, Potassium cyanide and Lead chloride. The effect of drugs gives different activating and inhibitory ratios. The results showed an increase in Prx3 level in the presence of (5 mM) for Ascorbic acid and Thiamin. Whereas, a decrease in the presence of Acetaminophen, Amoxicillin, Azithromycin, Cephalexin, Ibuprofen, Mefenamic acid, and Tetracycline, with the highest inhibitory percentage was found in Mefenamic acid and Ibuprofen.

طلب نسخة من الملف

الملفات غير منشورة على الموقع. اترك بياناتك وسيتواصل معك موظفو قسم الشؤون الثقافية والفنون لإرسال النسخة مجاناً.

الاسم

رقم الهاتف

البريد الإلكتروني

الغرض من الطلب (اختياري)

إرسال الطلب