التحري المظهري والجزيئي عن العصيات النزلية المحبة للدم من إصابات الجهاز التنفسي في مدينة الموصل

الباحث

زينة هشام جاسم حمو الدباغ

المشرف

شاكر غازي جرجيس المولى

الجامعة

جامعة الموصل

الكلية / القسم

كلية العلوم / قسم علوم الحياة

الشهادة

ماجستير

السنة

2023

لغة الرسالة

عربي

الكلمات المفتاحية

المستدمية النزلية ; الجهاز التنفسي ; الكشف الجزيئي ; مدينة الموصل

شملت الدراسة جمع 120عينة من عينات الجهاز التنفسي العلوي والسفلي من المرضى الراقدين والوافدين من كلا الجنسين للفترة من شهر تموز 2022 ولغاية شهر تشرين الثاني 2022 من مستشفيات عديدة في محافظة نينوى . شخصت العزلات جميعاً أعتمادا على صفاتها المظهرية والاختبارات الكيموحيوية والتشخيص باستخدام اختبار التبعية وياستخدام نظام API-NH وتأكيد التشخيص باستخدام تقنية الفايتك وتم الحمصول على 12عزلة تعود لبكتريا Haemophilus influenzae بنسبة 9%10 تم عزل انواع جرثومية sai بى سالبة لصبغة كرام التي شملت مايأتي Pseudomonas aeroginosa, Escherichia coli, Klebsiella pneumonia, Serratia marcescence, Neisseria meningitids, بنسب بلغت %10,%4.16,%0.83, %12.5,%10.8 be التوالى اما الانواع الموجبة لصبغة كرام شملت Staphylococcus aureus و Streptococcus pyogenes, Streptococcus pnumoniae Nocardia 9 بنسب بلغت %20,%10,%4.1,%1.6 $e التوالي . وتناولت الدراسة أيضاً طريقة اختبار جديدة ومحورة لظاهرة التبعية باستخدام بكتريا Streptococcus pyogenes ولأول مرة على المستوى المحلي ، كانت هذه الطريقة اكثر دقة في تشخيص A. influenzae LAS لانها اعطت نتيجة واحدة سلبية كاذبة بينما اختبار التبعية مع العنقوديات الذهبية اعطى اربع نتائج سالبة كاذبة ،وركزت الدراسة على أستخدام وسط ناقل جديد باستخدام بكتريا العنقوديات الذهبية مع وسط نقيع القلب والدماغ والدم وهو وسط محور إذ لاتوجد دراسات بهذا الخصوص تميز بكفاءته مقارنة بالأوساط الاخرى إذ أسهم في الحفاظ على البكتريا مدة سبعة أيام . تمت دراسة فعالية بعض الاوساط المستخدمة في حفظ العزلات وإدامتها منها (وسط نقيع القلب والدماغ مع الكليسيرول -وسط نقيع القلب والدماغ والدم المطبوخ مع الكليسيرول -وسط أكار pall المطبوخ في موائل - وسط أكار pall مع ظاهرة التبعية - وسط Skim milk trypton ( STGG 12 )- الوسط المحور في دراستنا وسط نقيع القلب والدماغ pally مع بكتريا Staph.aureus (، إذ اعطى الوسط المحور أعلى نسبة clad بكتريا A. influenzae نامية Baal سبعة أيام . وتم اختبار حساسية 12 عزلة من influenzae LPS .77 تجاه عدد معين من المضادات الحيوية وأظهرت النتائج أعلى مقاومة للمضدد الحيوي Erythromycin 5 Ampicillin Bacitracin s بس بة 100, يليها المض د الحيوي Chloramphincol بنسبة 3 بنسبة %75 Azithromycin, بنسبة %66.6 . وأجري تاكيد التشخيص باستخدام الطرائق الجزيئية بمقارنة تتابعات القواعد النتيروجينة باستخدام الجين rRNA 165 في المركز الوطني لمعلومات التقانات الحياتية NCBI باستخدام برنامج BLAST . وأجري الكشف عن الجينات التشخيصية المشفرة لبروتينات الجدار Omp6 وجين الانماط المصلية (a-d) وهو Hin-in والجين المشفر لمتعدد السكريات المحفظي BexA كما سجلت السلالتين 7551141 و ZESHA2 في بنك الجينات العالمي GenBank بالأرقام التسلسلية 1 و 00067240 على التوالي .و تم انشاءشجرة تطورية بين السلالات المحلية 11 و ZESHA2 وسلالات اخرى من influenzae UPS .77 والشجرة الثانية كانت بين السلالات المحلية ZESHAL و ZESHA2 وبين الانواع الاخرى لبكتريا H. influenzae وأظهرت النتتائج أن السلالتين ZESHAL و ZESHA2 لها علاقة تطورية متقاربة بنسبة 9099 و96,؟ على التوالي خاصة مع السلالة المصرية Haemopilus egyptius تم التحري عن قدرة بكتريا influenzae .77 على تكوين الاغشية الحيوية ، وأظهرت النتائج أن لعزلات بكتريا H. influenzae قيد الدراسة القدرة على أنتاج الاغشية الحيوية بنسبة 90100 ودنسب متباينة بين العزلات فبعضها كانت شديدة التكوين للغشاء والبعض متوسطة التكوين للغشاء والبعض الاخر ضعيفة التكوين للغشاء . تضمن المحور الاخير التحري عن قابلية مستخلصات الحمضيات (الليمون، نوم البصرةء البرتقال الياباني) على تثبيط بكتريا influenzae .77 إذ أظهرت النتائج أن عصير الليمون الطازج هو الاكثر فعالية بقطر تثبيط 27 ملم يليه المستخلص الكحولي للبرتقال الياباني ثم المستخلص الكحولي لنوم البصرة وهو الاقل فعالية وتمت دراسة تأثير هذه المستخلصات على تثبيط تكوين الغشاء الحيوي لبكتريا influenzae .17 وبينت النتائج أن عصير الليمون الطازج أعطى أعلى فعالية لتثبيط تكوين الغشاء الحيوي يليه المستخلص الكحولي لنوم البصرة ثم المستخلص الكحولي للبرتقال الياباني الذي أعطى اقل فعالية لتثبيط الغشاء الحيوي لبكتردا influenzae .11 .

A The study included collection of 120 specimens from the upper respiratory tract and lower respiratory tract from incoming and outgoing patients in the hospitals of mosul city. All isolates were diagnosed dependent on their phenotypic and biochemical tests and by using Satellitism Test and API-NH system, Twelve isolates at the rate 10%belonging to H. influenzae were obtained and their diagnosis was confirmed by using Vitek 2 compact system and molecular method, other bacteria were isolated and identified from respiratory tract samples were Gram negative bacteria such as, P.aeruginosa , E. coli, k.pneumoniae, S. marcescens ,N. meningitids, , at the rates of, 12.5%,10.8% 10%,4.16% ,0.83%, respectively and Gram positive bacteria included, Staph.aureus ,S. pneumonia S.pyogens, Nocardia nes ,at the rates20.8% , 10%,4.1%, 1.66%, respectively. The study also included new Satellitism test by using S.pyogenes instead of Staph.aureus for the first time this method was more accurate to identify H. influenzae because it was gave one false-negative result whereas satellitism by using Staph.aureus was gave four false-negative results. The study focused on the use of new transport media by using (BHI) broth with Staph.aureus ,this media used for transport and preserve and activate H. influenzae isolates H. influenzae stay alive for seven days The study investigated about some media for preserved H. influenzae isolates which was (BHI broth with glycerol - Chocolate BHI broth with glycerol - Chocolate agar slant - Satellitism plates - STGG medium - modified media in our study BHI broth with Staph.aureus the results showed that the modified medium gave highest period for kept H. influenzae isolates alive for seven days. Antibiotics susceptibility test was performed by using eight antibiotics and the results showed that most of H. influenzae isolates were resistance to antibiotics at the rates 100% for Erythromycin, Bacitracin and Ampicillin B whereas Chloramphenicol and Cefotaxime and Azithromicin at the rates 83.3%, 75%,66.6% respectively. Molecular diagnosis was carried out using 16SrRNA gene based on the sequencing method on NCBI National Center for Biotechnology Information website by using BLAST program. The study also included molecular identification for the gene encoded the outer membrane protein Omp6 and the gene encoded for serotypes ( a- d) and the gene encoded for the Hin-in Polysaccharide Capsule BexA gene .The strains ZESHA1 and ZESHA2 were submitted to GenBank under the accession number OQ067241 ,OQ067240 respectively.Two phylogenetic trees has been created between the strains ZESHA1 and ZESHA2 and the related strain of H. influenzae and the second tree showed the relationship between the strains ZESHA1 and ZESHA2 and the related species of Haemophilus spp. the results showed that the strains ZESHA1 and ZESHA2 have more relationship with these strains in the phylogenetic trees at the rates 99% and,96% respectively, especially with straine H. egyptius. Also we investigated for the ability of H. influenzae to producing biofilm and the results showed that all isolates produced biofilm at the rate 100% but varying in degrees some isolates were strong biofilm producer and some were are moderate biofilm producer other were weak producer. The last part of the study included using Citrus plant which was Citrus lemon and black dried lemon and Citrus japonica and investigated their alcoholic extracts to inhabit the growth of H. influenzae and the results revealed that fresh lemon juice the most effective against H. influenzae followed by C.japonica and then black dried lemon and this study investigated on the effectiveness of these extracts for the inhibition of the biofilm formation and the results showed that lemon juice the most effectiveness.

طلب نسخة من الملف

الملفات غير منشورة على الموقع. اترك بياناتك وسيتواصل معك موظفو قسم الشؤون الثقافية والفنون لإرسال النسخة مجاناً.

الاسم

رقم الهاتف

البريد الإلكتروني

الغرض من الطلب (اختياري)

إرسال الطلب