العوامل البيئية المؤثرة على مستوى التعبير الجيني لعدد من الجينات في تكوين الطور الخيطي لخميرة المبيضات Candida albicans

الباحث

مروة حسين حمادي الجبوري

المشرف

محمد إبراهيم خليل الطائي

الجامعة

جامعة الموصل

الكلية / القسم

كلية العلوم البيئية / علوم البيئة

الشهادة

ماجستير

السنة

2023

لغة الرسالة

عربي

الكلمات المفتاحية

Candida albicans ; التعبير الجيني ; الطور الخيطي ; العوامل البيئية

شملت الدراسة الى جمع عينات سريرية لفطريات جنس ال Candida لأعمار مختلفة ومن كلا الجنسين من المرضى المراجعين لمستشفيات مدينة الموصل وهي كل من مستشفى السلام التعليسي ومستشفى الخنساء التعليمي للفترة من2022-8-10 ولغاية2022-11-5 حيث تضمنت الدراسة جمع 100عينة منها 70 عينة من الجهاز التناسلي الانثوي 302عينة من الفم وباستخدام مسحات معقمة . أظهرت النتائج عزل وتشخيص أربع عزلات من خمائر المبيضات مظهريا ومجهريا وبالأعتماد على الاختبارات التشخيصية والكيموحيويةوالجزيئية من مجموع 0عينة موجبة وهي C.tropicalis عينة واحدة )%3( (%10)4u:3 Nakaseomyces sp, pichia kudriavzevii 12 عينة )%40( C.albicans 14عينة(9046) حيث تم تأكيد التشخيص الجزيثي بتقنية ال Polymerase Chain Reaction اعتماداً على منطقة 115 0 لتشخيص العزلات الفطرية المسجلة في المركز العالمي للتقنيات الحيوية (NCBI سجلت أعلى إلاصابات في الجهاز التناسلي الأنثوي وبنسبة )34%( و سجلت الفئة العمرية 39-9 أكثر ألفئات إصابة بداء المبيضات بينما سجلت ألاصابات بمنطقة الفم نسبة )20%( وبينت نتائج دراسة تأثير بعض العوامل البيئية المؤثرةعلى النمو الخيطي لأنواع خمائر المبيضات وباستخدام درجات حرارة مختلفة(20: 25، 30: 35: 40)خ أن أعلى درجة لتحفيز النمو الخيطي كانت عند درجة حرارة )240( لعزلة .C.albicans وأظهر تاثير الاس الهيدروجيني والذي استخدمت فيه قيم 64.5 65.0 65.5 66.0 6.5 أعلى تحفيز للنمو الخيطي عند قيمة 6.5 pH لعزلة C.albicans . وبينت نتائج تاثير استخدام وسط مستخلص البطاطا المحضر مختبريا المضاف اليه السكريات المستخدمة السكروز والفركتوز والمانيتول أعلى تحفيز للنمو الخيطي في وسط أكار مستخلص البطاطا والسكروز لعزلة C.albicans . تقاربت gil تشخيص الكشف المظهري مع نتائج التشخيص الجزيئي بتقنية ال PCR وتم أجراء دراسة تفاعل بعض العوامل البيئية من درجة حرارة pHs وأوساط غذائية مختلفة منها وسط مستخلص البطاطا والسكروز السائل ووسط مستخلص البطاطا ودكستروز السائل ووسط مصل الدم باستخدام تقنية Real- time Polymerase Chain Reaction اذ تم قياس تعبير كل من الجينين HGCILHWPI المسؤولين عن تحفيز التحول الشكلي لبعض أجناس ال Candida من الشكل أحادي الخلية الى الشكل الخيطيء وبينت النتائج ان مستوى التعبير الجيني لجين 757001 أعطى ارتفاعأعندعزلة Ge Calbicans بلغ التعبيرالجيني 41.32 في وسط مستخلص البطاطا والسكروز السائل عند درجة حرارة 240 قيمة pH 6.5 وأعطى تعبيراً في وسط المصل عند درجة حرارة 37م 825. 33. بينما أظهر تعبير الجين HWPI لعزلة Calbicans في وسط مستخلص البطاطا والسكروز السائل21.81 في Gus أظهر كلا الجينين تعبيراً منخفضاً عند وسط مستخلص البطاطا ودكستروز السائل في مختلف درجات الحرارة المستخدمةحيث بلغ التعبير لجين 506007 1.63 عند عزلة 5 عند days حرارة40 pH6.5<a في حين بلغ تعبير جين 7117/27/عند نفس درجة الحرارة وقيمةال 11م0.91 اذ كانت أقل من عينة السيطرة عند درجة حرارة 37 م ، 5.5 pH التي قيمة التعبير عندها 1 عند عزلة Calbicans دلالة على ان درجة الحرارة لها تاثير على زيادة تعبير جينات النمو الخيطي بالاعتماد على طبيعة الوسط الغذائي عأما عند عزلة Gin Nakaseomyces sp النتائج أن جين2817727 كان التعبير5.96 اعلى على وسط مستخلص البطا Ub والسكروز السائل أماعندجين HGCI عند نفس درجة الحرارة وقيمة PH بلغ تعبيره 0.94حيث كان منخفضا في جميع درجات الحرارة المستخدمة دلالة على عدم وجود علاقة بين الجين والعزلة Ging النتائج أن جين 2772817 لم يحفز في وسط مصل pall عند درجة حرارة 237 عزلة.م5 Nakaseomyces أي لها تأثير مثبط على الجين على عكس عزلات C.albicans، C.tropicalis وقد اعتبرت هذه النتيجة علامة تحديد وراثية للتمييز بين أنواع المبيضات التي يحدث عندها التحول الشكلي .

املخلص A The current study aimed to collecting clinical samples of Candida Spp. from patients with various ages and from both sexes, who visit the Mosul city hospitals (AlSalam teaching hospital and AlKhansaa teaching hospital for the period from 10/8/2022 until 5/11/2022. The study involved collecting (100) samples; 70 of which were taken from the female genital systems and 30 samples were taken from the mouth using sterilized swaps. The results showed that four albicans were identified and isolated morphologically and microscopically depending on the diagnostic and biochemical tests. Thirty (30) positive samples were identified including one sample of C.tropicalis (3%), three samples of Nakaseomyces sp (10%), twelve samples of pichia kudriavzevil (40%) and fourteen samples of C. albicans (46%). The diagnosis was confirmed based on the ITS region to identify the fungi isolates registered at the National Biotechnology Center (NCBI). The highest incidences were recorded in the genital system (34%). The age group (29-39) years old was the highest incidence of infection with candida sp., while the percentage of incidences in the mouth was (20%). Moreover, results of studying the effect of some environmental factors on the filamentous growth of some albicans yeasts types at the temperatures (20, 25, 30, 35 and 40) centigrade degrees. The highest level of stimulating the filamentous growth was at the temperature 40 ̊C for C. albicans. The effect of pH with values (4.5, 5.0, 5.5, 6.0 and 6.5) was also clear and the highest stimulation was at the pH value of 6.5 for the C. albicans. Moreover, the results of the effect of using the potato extract to which sucrose, fructose and mannitol showed that the highest filamentous growth was in the extract of potato sucrose for C. albicans isolate. The results of the morphological diagnosis test were close to the results of the molecular diagnosis using the PCR technique. The study of some environmental factors like the temperature and pH value in various saccharide media such as the potato extract and liquid sucrose, potato املخلص B dextrose extract and the blood serum medium using the Real-Time Polymerase Chain Reaction. The expression of the genes HWPI and HGC1 which are responsible for the morphological transformation of Candida spp. Were measured. The results showed that the level of the gene expression of HWPI and HGCI gave a rise to the C. albicans isolate, as the HGC1 gene gave the highest gene expression with a percentage of 41.32 in the medium of potato extract and liquid sucrose at 40 ̊ C and a pH value of 6.5. It gave a high expression in the blood serum at 37 ̊ C with a value of 33.82, whereas the HGC1 expression of C. albicans isolate in the extract of potato and liquid sucrose gave a percentage of (21.8). From the other hand, the two genes demonstrated a low expression at the medium of liquid potato dextrose in the different temperature degrees used. The expression of HGC1 was 1.63 of the Candida albicans at 40 °C, pH 6.5, while the expression of HWP1 at the same temperature and pH values was 0.91 and it was lower than the control sample (that has an expression value of 1 for the candida albicans isolate) at 37°C and pH 5.5. This means that the temperature degree has an effect on the increase of the expression of the filamentous growth genes depending on the nature of the medium. As for the Nakaseomyces sp.,results showed that the gene HWP1 had a higher expression on the potato sucrose broth (5.69), the gene HGC1, at the same temperature and pH had a value of 0.94 and this value was low at all the temperature degrees and this refers that there is no relationship between the gene and the isolate. Additionally, the study showed that the HWP1 gene didn’t stimulate the growth in the blood serum for Nakaseomyces،isolate on the contrary of the isolate of C.tropicalis، C.albicans and this result was considered as a genetic specification sign used for the discrimination between the Candida species.

طلب نسخة من الملف

الملفات غير منشورة على الموقع. اترك بياناتك وسيتواصل معك موظفو قسم الشؤون الثقافية والفنون لإرسال النسخة مجاناً.

الاسم

رقم الهاتف

البريد الإلكتروني

الغرض من الطلب (اختياري)

إرسال الطلب