دراسة تشخيصية للإصابة بمرض الحمى المنقولة بالقراد في الأبقار في مدينة الموصل، العراق

الباحث

عبير سالم حازم محمد النقيب

المشرف

قيس طالب شكر السرحان

الجامعة

جامعة الموصل

الكلية / القسم

كلية الطب البيطري / التشخيصات المرضية البيطرية

الشهادة

ماجستير

السنة

2023

لغة الرسالة

عربي

الكلمات المفتاحية

الحمى المنقولة بالقراد ; الأبقار ; الأنابلازما ; التشخيص الجزيئي

هدفت الدراسة الحالية لتشخيص وتحديد نسبة العينات الموجبة للإصابة بجرائيم G48 Anaplasma phagocytophilum الأبقار والقراد المخمج لها باستخدام الفحص المجهري لمسح الدم وتقانة تفاعل البلمرة المتسلسل المتداخل في مدينة الموصلء العراق مع تحديد التوافق بين الاختبارين اعتمادا على قيمة كابا وحساب حساسية وخصوصية ودقة الفحص المجهري بالمقارنة مع تقانة تفاعل البلمرة المتسلسل المتداخل، وتحديد معايير الجودة للمقارنة بين الصبغات المختلفة المستخدمة في مسح الدم لتشخيص als ،A. ١.١. مع تشخيص وتصنيف أنواع القراد المتطفل على الأبقار اعتماداً على الصفات الشكلية وتحديد امكانية نقله لجراثيم A. phagocytophilum إلى la! فضلا عن تحليل شجرة النشوء الجينية لجراثيم A. phagocytophilum المشخصة في الدراسة. شملت الدراسة 50 حيوانا من الأبقار مثلت (38 بقرة و 12 ثور) وبأعمار مختلفة وسلالات ونظم dy yi مختلفة، تم تأمينها جميعاً من مناطق مختلفة من مدينة الموصل والحالات الواردة إلى المستشفى التعليمي البيطري للفترة الممتدة من بداية شهر أيلول 2022 إلى نهاية شهر تموز 2023. تم جمع 3 مليليتر من 50 راساً من الأبقار من الوريد الوداجي ووضعها في انابيب حاوية على مانع تخثر نوع (EDTA) لغرض عمل مسح الدم الرقيقة والسميكة ¢ كما تم عمل مسح من الغلالة الشهباء للكشف الأولي عن جراثيم phagocytophilum .4 ، وتم حفظ الباقي من الدم وبدرجة - 20 م* ual اجراء تقانة تفاعل البلمرة المتسلسل المتداخل لغرض تأكيد الإصابة بجراثيم phagocytophilum .4. كما تم عمل مسح لمفية من الخزع المأخوذة من العقد اللمفية امام لوح الكتف لغرض الكشف عن الاجسام الاشتمالية ( (Morulae داخل الخلايا اللمفية. وتم أيضاً جمع 169 من القراد المتطفل على الأبقار ومن مناطق مختلفة من جسم الحيوان لغرض تصنيفها وعمل مسح من سائل الدم اللمفي للقراد للكشف عن الاجسام الاشتمالية في خلايا سائل الدم اللمفي باستخدام الفحص المجهري وتشخيص اصابتها بجراثيم 5١571 ل باستخدام تقانة تفاعل البلمرة المتسلسل المتداخل. استخدمت أنواع مختلفة من الصبغات شملت صبغة الكيمزا الجاهزة وصبغة المثيلين الأزرق وصبغة كرام الجاهزة وصبغة الأكردين AMEE pall لغرض صبغ المسح المحضرة في Aust jal ولتحليل شجرة النشوء الجيني استعملت التسلسلات الجينية المحلية للجين 16SrRNA لجر اثيم phagocytophilum .4 المشخصة في الدراسة تم استخدام برامج خاصة، وأظهرت نتائج الدراسة الحالية أن الأبقار المصابة عانت من الشكل الحاد من ،ca pall وبلغت نسبة العينات الموجبة بجراثيم A. phagocytophilum %58 و %72 بإستخدام الفحص المجهري و تقانة تفاعل البلمرة المتسلسل المتداخل على التوالي. كما لوحظ وجود توافق حقيقي بين الاختبارين في تشخيص الاصابة بجراثيم phagocytophilum .4 في الأبقار بالاعتماد على قيمة LIS والتي بلغت (0.699) مع نسبة حساسية وخصوصية ودقة بلغت 9080.55 و 0 و %86 على التوالي للفحص المجهري مقارنة بتقانة تفاعل البلمرة المتسلسل المتداخل، وهذا يدل على كفاءة كل من الفحص المجهري وتقانة تفاعل البلمرة المتداخل في الكشف عن الإصابة بجراثيم phagocytophilum .4 في الأبقار المصابة. كما اظهرت نتائج الفحص المجهري لمسح الدم ومسح الغلالة الشهباء والمسح اللمفية وجود التويثة داخل LOK الدم البيض وبأحجام مختلفة مع نسبة تطفل تراوحت 6 - 9029 و 10- 0 %35-305 على ،sll sill تضمنت أعلى نسبة تطفل معنوية (P<O.05) في الخلايا العدلة مقارنة مع بقية خلايا pall البيض. وعدت صبغة الكيمزا الجاهزة كأفضل صبغة في تشخيص الأجسام الاشتمالية لجراثيم phagocytophilum .4 مقارنة بالصبغات الأخرى المستخدمة في الدراسة اعتماداً على معايير الجودة. تم في هذه الدراسة تصنيف أربعة أنواع من القراد الصلب المتطفل على الأبقار تضمنت Hyalomma anatolicum anatulicum و 5اآ1117116 50119 Rhipicephalus و Rh. %23.075 %39.64 وبنسب تطفل بلغت Boophilus annulatuss turanicus هو النوع 7. anatolicum anatolicum على التوالي، وكان النوع %15.385 %21.89 5 واعتماداً على الفحص المجهري لمسح سائل الدم اللمفي وتقانة (P<0.05) الشائع معنويا في 4. phagocytophilum تفاعل البلمرة المتسلسل المتداخل تم تشخيص الإصابة بجراثيم جميع أنواع القراد المشخصة في الدراسة. 5) A. phagocytophilum أظهرت نتائج تحليل التسلسلات الجينية المحلية لجراثيم و012002121.1 و OROO2120.1) تسلسلات) والمسجلة في بنك الجينات بأرقام تسلسلية و019002124.1 ) وجود نسبة تشابه 90100 مع OROO02123.1s OROO2122.1 التسلسلات الجينية المسجلة في جنوب النرويج وجنوب كوريا وإسبانيا وجنوب افريقيا واليابان Bale} محاذاة 100، وبينت شجرة النشوء الجيني بعد إجراء da pars وبولندا وملاوي وليتوانيا تشكيل التسلسلات النيوكلوتيدية 1000 مرة وجود علاقة تطورية عالية بين التسلسلات الجينية مع التسلسلات العالمية للجراثيم نفسها المشار اليها A. phagocytophilum المحلية لجراثيم ode! في استنتجنا من هذه الدراسة تشخيص جراثيم A. phagocytophilum في دم الأبقار والقراد المتطفل عليها في مدينة الموصل-العراق، وتسجيل ولأول مرة تسلسلات جينية محلية لجراثيم phagocytophilum لم في بنك Glial! العالمي والتي قد تكون مفيدة للدراسات المستقبلية ولاستراتيجية السيطرة على هذه الجراثيم في منطقة الدراسة.

A The study aimed to diagnose and determine the percentage of the positive samples for A. phagocytophilum in infected cows and it is infested ticks using microscopic examination of blood smears (ME) and nested polymerase chain reaction (N-PCR) technique in Mosul city, Iraq, to determine the agreement between the two tests based on Kappa value and calculating sensitivity, specificity and accuracy of ME in comparison with the N-PCR technique, to determine quality criteria to comparison between different stains used in blood smears for diagnose A. phagocytophilum, and to identify and classify the type of ticks infested cows, furthermore, to investigate the phylogenetic analysis of the A. phagocytophilum which is diagnosed in the present study. The study was included 50 cows comprised (38 cows and 12 bulls), with different ages, and management, were obtained from various regions in Mosul city and from the cases brought to the teaching veterinary hospital/ university of Mosul. which was clinically suspected infected with A. phagocytophilum. During the period from the beginning September 2022 to the end July 2023. Blood samples (3 ml) were collected from 50 cows via jugular vein then kept in tubes with anticoagulant ethylene diamine tetra aceticacid (EDTA) for preparing thick and thin blood smears if it is not possible to make from ear vein, as well as buffy coat smears were prepared for the primary detection of A. phagocytophilum. The reminder of the blood was stored at -20°C until used in N-PCR technique for the confirming in A. phagocytophilum infection. Furthermore, lymph smears were prepared from prescapular lymph nodes biopsy to detect inclusion bodies (Morulae) inside the lymphocytes. One-hundred and sixty-nine ticks infested cows were collected from different parts of body for classifying and ticks blood B smears preparing to detect the morulae in the hemolymph cells inside them using ME. In addition, to diagnose A. phagocytophilum inside infected ticks using N-PCR technique. Different types of stains were used, including ready- Giemsa stain, methylene blue stain, ready-Gram stain, and acridine orange stain, for staining the smears prepared in the current study. Special programs were used to phylogenetic tree analysis used of the local genetic sequences for the 16S rRNA gene of A. phagocytophilum detected in the present study. The results of the current study observed that the infected cows suffering from acute form of the disease, with the percentage of positive samples to A. phagocytophilum was 58% and 72% using ME of blood smears and N-PCR technique respectively. A substantial agreement was showed between ME of blood smears and N-PCR technique according to Kappa value (0.699), with high sensitivity, specificity and accuracy of ME method were 80.55%, 100%, 86% respectively compared with N- PCR technique. This indicate that the both ME method and N-PCR technique were efficient in the detection of A. phagocytophilum in infected cows. In the present study, ME of blood, buffy coat and lymphatic smears observed that the presence of the morulae inside white blood cells of different sizes, with parasitemia ranged from 6-29%, 10-40%, and 30- 35%, respectively, which included statistically significant (P<0.05) highest parasitemia in neutrophils compared to other white blood cells. Moreover, the ready-Giemsa stain was used as the best stain for the detection of the morulae of A. phagocytophilum compared to other stains used in the present study based on the quality criteria. In the current study, four species of hard ticks infested cows were identified and classified includes Hyalomma anatolicum anatolicum, Rhipicephalus sanguineus, Rh. Turanicus and Boophilus annulatus with the infestation rate were 39.64%, 23.07%, 21.89% and 15.38% respectively, with significantly (P<0.05) most common H. anatolicum anatolicum species. Moreover, based on ME of hemolymph smears and N-PCR technique, A. phagocytophilum infections were detected within all species of hard ticks diagnosed in this study. The phylogenetic analysis of the local genetic sequences of A. phagocytophilum which were recorded in the NCBI Genbank under the accession numbers (OR002120.1, OR002121.1, OR002122.1, OR002123.1 and OR002124) were observed highly related (100%) to those sequences has been recorded in the Genbank such South Norway Southern Korea, Spain, South Africa, Japan, Poland, Malawi, and Lithuania with alignment score 100 . Additionally, the phylogenetic tree after performing 1000 nucleotide sequence reconstructing using MEGA 11-Bootstrap analysis showed a high developmental relationship between the local sequences of A. phagocytophilum with other global sequences same bacteria indicated above. Authors concluded that A. phagocytophilum is detected in cows and it is infested ticks in Mosul city-Iraq, and local genetic sequences of A. phagocytophilum were recorded in the NCBI Genbank for first time, This finding might be advantageous for the future studies and strategically control of these bacteria in the study area.

طلب نسخة من الملف

الملفات غير منشورة على الموقع. اترك بياناتك وسيتواصل معك موظفو قسم الشؤون الثقافية والفنون لإرسال النسخة مجاناً.

الاسم

رقم الهاتف

البريد الإلكتروني

الغرض من الطلب (اختياري)

إرسال الطلب